胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是从健康母牛怀孕4至8个月的胎牛血液中提取的，通过无菌采集和微孔过滤等多个步骤而制成的。当前，它被广泛应用于各种真核细胞的培养中，提供关键的营养成分和细胞生长因子，已成为众多实验室的必备材料。为了最大限度地发挥胎牛血清的作用，并确保细胞状态的良好，我们为实验人员总结了一些实用建议。以下是一些值得关注的要点：

一、首次开封胎牛血清如何解冻？

通常，胎牛血清应在-20℃储存，若需长期保存，建议在-80℃下保存。在解冻过程中，应避免直接在常温（25-37℃）中解冻，以免产生絮状沉淀，可能影响血清的品质。推荐的解冻方法是将血清从-20/-80℃转移至4℃，待完全化冻后再转至室温。在解冻时，需轻轻摇动管子，以确保血清成分和温度均匀混合，减少沉淀的形成。解冻后，可以将血清分装于15mL或50mL的无菌离心管中进行冷冻储存；可根据使用频率在4℃保存一次已解冻的血清，但最好在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温中放置过久，以免重要的细胞生长因子失活，影响细胞状态。

二、血清的用量

在血清添加量方面，通常不宜过多，常见添加比例为5%、10%或20%。大部分细胞在正常培养中采用10%的血清浓度，而一些原代细胞提取时可能使用20%。具体某一株细胞适应的血清浓度需根据细胞特性及实验目的进行调整。

三、何时需要热灭活胎牛血清？

热灭活是一种处理方法，通常在56℃下加热30分钟以去活化补体。补体参与的反应包括溶细胞、平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放等。对于常规细胞培养，热灭活并非必须，处理过的血清可能会因为高温导致品质下降，从而影响细胞生长速度及沉淀物的增加。

四、更换血清的正确步骤

在细胞培养过程中，常常需要更换血清。注意，直接使用另一种血清配制的培养基可能导致细胞生长缓慢或脱壁死亡。这通常是因为细胞已适应原有的培养环境，突然更换新营养环境会对其产生冲击。在更换时，建议遵循梯度替换的方法，以帮助细胞适应。开始使用新血清时，可以按照1:3的比例替换，逐渐调整至1:1，再到3:1，最终实现完全更换。对于那些对培养体系敏感的细胞，替换比例应更加细致。

五、解冻后的血清出现悬浮物，是否仍可使用？

如果在解冻后观察到少量乳白色絮状或点状物质，这通常来自血清中的肥蛋白变性及纤维蛋白，不会影响血清本身的质量。可以通过离心（400×g，5分钟）去除这些絮状物，且对细胞的影响非常小。

六、血清在使用前是否需过滤？

通常，购买的胎牛血清为无菌状态，无需再次过滤。如发现血清中有悬浮物，可将其加入培养液并一起过滤，但切忌直接过滤血清。

七、细胞培养中观察到的“黑点”是否为污染？

如在细胞培养过程中看到黑点，需首先观察培养基是否浑浊，以及黑点是否规律游动。如果细胞未受污染，生长状态良好，与黑点出现前无变化，那么黑点可能是由于细胞生长自然破碎后的残骸，或是血清中的杂蛋白引起的。这些黑点可以通过离心或过滤去除。对于原代细胞，黑点可能源于组织中的杂质，而通过多次传代可消除。

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