背景:在生物体内,基底膜是一种以细胞为基础的薄层细胞外基质。基质胶是一种可溶性的基底膜制剂,来源于Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤,这种肿瘤富含多种细胞外基质蛋白。其主要成分包括层粘连蛋白、胶原蛋白I、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白。此外,基质胶还富含转化生长因子β、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活物,以及其他在S肿瘤中自然出现的生长因子。基质胶在正常和转变的锚定依赖型上皮样细胞及其他细胞类型(如神经元、肝细胞、支持细胞和血管内皮细胞)的附着和分化上表现出良好的效果。
在成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞以及小鼠和人乳腺上皮细胞的三维细胞培养中,基质胶能够显著影响基因表达,这为多种类型的肿瘤细胞侵袭实验提供了基础。此外,基质胶还促进了内源性神经再生,并为体外与体内的血管再生研究提供了必要的底物。基于其强大的生物相容性,基质胶还被应用于免疫抑制小鼠体内的人类肿瘤增殖实验。同时,基质胶可用于未分选乳腺细胞的移植和分选的上皮细胞亚群的嵌入。这种基质还被用于癌症细胞模型,并证明在体内能够促进肿瘤生长速率。
尊龙凯时的KELBiotechMatrix基质胶对温度非常敏感,需避免多次冻融。进行基质胶的分装及凝胶前准备时,必须在4℃的冰上操作,以防止因温度升高而导致的成胶现象,从而影响基质胶的均匀性及后续使用效果。收货后,如果暂时不使用,应将整瓶基质胶直接存放在-20℃冷冻(注意不要放置在无霜冰箱)。首次使用时,需将整瓶KELBiotechMatrix基质胶置于冰盒中,放入4℃解冻过夜,以确保完全融解。
在使用时特别注意:KELBiotechMatrix基质胶在22-35℃环境中会迅速成胶。为确保其成胶性能与稳定性,最终稀释浓度不应低于3mg/mL(请注意,KELBiotechMatrix基质胶的浓度可能因批次有所不同)。可利用无血清培养基对基质胶进行稀释,稀释后需要立即使用。
薄胶制备方法:
1)融化后,用预冷的枪头均匀混合KELBiotechMatrix基质胶。
2)将培养板置于冰上,按50μL/cm²生长面积的浓度加入基质胶。
3)在37℃下放置30分钟后,平板即可使用。
厚胶制备方法:
1)融化后,用预冷的枪头均匀混合KELBiotechMatrix基质胶。
2)将培养板置于冰上,混合所需细胞与基质胶,用预冷的枪头确保细胞均匀悬浮,随后按150-200μL/cm²生长面积的浓度加入基质胶。
3)在37℃下放置30分钟后,即可加入细胞培养液,细胞也可以在厚胶的上层生长。
薄层包被方法:
1)融化后,用预冷的枪头均匀混合KELBiotechMatrix基质胶。
2)使用无血清培养基将KELBiotechMatrix基质胶稀释到所需浓度,建议通过梯度实验来确定最佳包被浓度。
3)将稀释后的基质胶加入需要包被的培养器皿中,包被量至少应覆盖细胞的所有生长表面,在室温下孵育1小时。
4)去除未凝固的基质胶,用无血清培养基轻轻冲洗,此时平板即可使用。
请注意,包被后的平板最好当天使用,但可根据具体应用进行调整,加入培养基后,在37℃下可以存放最长1周。对于色差的变化(从淡黄色到深红色),这通常是由于酚红和碳酸氢盐在CO₂作用下造成的,但在5% CO₂平衡后色差将减少。融化的KELBiotechMatrix基质胶在冻融过程中可能会发生颜色变化,操作时请保持在冰冷环境中,并使用无菌技术确保实验的可靠性。
综上所述,尊龙凯时的KELBiotechMatrix基质胶不仅为细胞培养提供了理想的微环境,还在生物医学研究中展现了出色的性能,是细胞附着、分化及肿瘤生长研究的理想选择。