酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种广泛应用于生物医疗领域的检测技术。它通过将可溶性的抗原或抗体固定在聚苯等固相载体上，利用抗原抗体结合的特异性进行定性与定量的免疫反应检测。ELISA的主要目的是检测血清、尿液及细胞上清等生物液体中的特定抗原，以实现精确的定量分析和临床诊断。

ELISA的基本原理是将已知的抗原或抗体吸附到固相载体的表面，随后通过与酶标记的抗原或抗体反应，监测固相表面发生的化学反应。这项技术具有灵敏度高、特异性强等优点，适用于多种生物医学研究和临床检测。

在实验过程中，首先设置标准孔、空白孔和样本孔。在标准孔中加入100μL稀释的标准品，空白孔中加入稀释液，其他孔内加入100μL待测样本。为了提高实验的可靠性，建议采取复孔设置，并通过预实验确认样本的稀释比例。接下来，将酶标板加盖并在37℃下孵育90分钟。在加样时，需要小心放置样本，避免接触孔壁，并轻轻摇晃。建议在10分钟内完成加样。

在处理完样品后，用生物素化抗体工作液（100μL）处理每个孔，再次在37℃下孵育1小时。然后，进行洗涤程序，使用洗涤液（350μL）浸泡每孔1分钟，并重复洗涤3次，以去除多余的液体和非特异性结合的成分。此步骤中，可以借助洗板机来提高效率。

接着加入HRP酶结合物工作液（100μL），在37℃下温育30分钟，再次进行5次洗涤。最后，添加底物溶液（TMB，90μL），在37℃避光条件下孵育约15分钟，根据显色变化适时终止反应。终止液（50μL）应按顺序添加，以确保数据的准确性。

使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度（OD值），依据实验条件的不同，标准曲线的OD值可能会有所变化。在此，提供一份实验室建立的标准曲线供参考：

NE浓度(ng/L) OD值：
200 - 2.36
310 - 0.15
4450 - 0.98
2500 - 1.25
31600 - 0.81

对于样本的准备，血清或血浆样本通常为100μL用于检测一个指标。未经分离处理的全血样本（1mL）大约可分离100-200μL血清，样本需在4℃下保存并送检。其他液体样本应在-20℃冰冻保存。组织样本至少为0.1g（约黄豆大小），经过匀浆处理后主要获取500μL的上清液，能够检测5个指标，样本应在-20℃保存。

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