### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人结肠腺癌细胞LS1034

**生长特性**：贴壁生长

**冻存条件**：无血清冻存液

**培养体系**：1640 + 10% FBS + 1% P/S

**传代方法**：建议第一次按1:2比例进行传代。每两天更换培养基。

**备注**：使用无菌离心管收集培养基瓶中，供后续对比使用。如对比培养效果不佳，建议购买**尊龙凯时**的完全培养基。

### 二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，在细胞培育良好状态下，灌满完全培养液，封好瓶口以确保运输安全。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长，并拍照保存（建议使用40x、100x、200x的显微镜倍数各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，默认收到的状态良好。

**细胞传代步骤**：

a. 在细胞未超过80%汇合度时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱。如果细胞密度超过80%，请按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS缓冲液冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟；用显微镜观察细胞情况。如细胞大部分变圆并脱落，迅速取出操作，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

### 三、细胞冻存和复苏步骤

细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻微颠倒观察，直至细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，请在-80℃冰箱存放24小时以上。

细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，外壁用75%酒精擦拭消毒。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会出现脱落现象，属于正常现象。如果观察到细胞脱离较多，可将所有培养液收集至离心管，并1000RPM离心5分钟，随后进行重悬和消化操作。最后，请按1:2比例进行分瓶传代。

### 五、售后条款

**1）可重发的情况**：

• 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况可重发。
• 收到细胞48小时内若出现污染，提供真实实验结果经核实后可重发。
• 常温发货的细胞静置24小时后及干冰发货的细胞复苏后24小时内，绝大多数细胞未存活（需提供细胞状态照片）可重发。
• 细胞活性问题，需在收到后7天内以台盼蓝染色法验证并提供结果，核实后可重发。

**2）不予重发的情况**：

• 客户自行导致的细胞污染不重发。
• 不当操作及非推荐培养体系引起的细胞状态不良不重发。
• 缺乏培养前3天的照片或者在收到后两天内未告知问题不重发。

我们致力于为您提供最佳的生物材料服务，欢迎选择**尊龙凯时**，期待与您保持长期合作。