产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板，无需额外准备。

2. 优化的引物组合

引物及其他组分经过精心优化，显著提高了测试的灵敏度。

3. 阳性对照检测

提供阳性对照，有助于准确区分假阴性样品。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 定性与定量检测兼容

该试剂盒可用于定性和定量检测，且在定量检测时，线性范围至少可覆盖5个数量级。

6. 足够的反应次数

本产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 仅限科研使用

此试剂盒仅限于科研用途，相关实验步骤如下：

一、DNA提取

选择合适的方法提取纯化样品DNA，与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线样品稀释

为了避免阳性对照浓度过高导致实验污染，稀释操作建议在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10E8拷贝/μL），震荡均匀后得到标准样品（1×10E7拷贝/μL）。
4. 继而依次稀释，直到得到6个不同浓度的标准曲线样品。
5. 如果不制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

针对N个待检样品，准备N+2个PCR管，加入相应成分（详细说明参见说明书）。

四、模板添加

向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，之后离心处理。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器，进行扩增，具体程序可参考详细说明书。

六、结果分析

若制作标准曲线，阳性对照浓度的log值与Ct值作图以绘制标准曲线；若未制作标准曲线，按以下标准分析结果：

• 阳性对照： Ct值<30，明显指数增长，呈S型曲线。
• 阴性对照： Ct值38或无Ct值，无指数增长。
• 样本检测结果： Ct值<35，阳性；Ct值38或无Ct值，阴性；Ct值在35-38之间需复检，经复检仍处于此范围但有指数增长则视为阳性，否则为阴性。

运输及保存

产品应在低温条件下运输，存储在-20℃以保持有效期为一年。阳性对照需单独存放，以防污染其他试剂。

选择尊龙凯时的检测试剂盒，助力您的科研工作，更高效、准确地完成实验。