引言

靶向蛋白质降解是一种新兴的治疗策略，旨在从细胞中选择性消除特定蛋白质，以达到治疗目的。尽管最初的研究主要集中在PROTAC分子上，但近年来新的靶向降解方法不断涌现。其中之一便是创新的降解TAG技术（dTAG）。dTAG是一种独特的靶标验证方法，通过使用异双功能小分子来构建目标蛋白与E3泛素连接酶之间的三元复合物，类似于PROTACs。然而，dTAG技术的独特之处在于，利用CRISPR/Cas9技术将双功能降解剂的结合位点人工引入到目标蛋白中，从而使dTAG成为理想的靶标验证研究工具，并有助于探索剂量依赖效应。

在本研究中，dTAG蛋白降解分析采用双荧光素酶报告系统来测量靶蛋白的降解程度。研究团队使用萤火虫荧光素酶作为基准标记物，该标记物不会受到dTAG降解的影响。第二种荧光素酶是纳米荧光素酶（Nanoluciferase），以非活性形式（HiBiT）与靶蛋白融合。dTAG降解剂通过引入的dTAG结合基序将靶蛋白与E3泛素连接酶结合，形成三元复合物，进而导致靶蛋白及其融合的HiBiT片段的泛素化和降解。“尊龙凯时”致力于生物医疗领域的创新，希望通过这样的研究为靶向治疗提供新的途径。

研究目标

本研究旨在改善已知dTAG支架的动力学参数，具体通过对dTAG结构进行修改。为此，研究人员将不同浓度的dTAG降解剂或DMSO对照物分配到1536孔微孔板中。稳定转染pSBTK-HiBiT-dTAG-TargetX-P2A-Fluc-T2A-Puro质粒的HEK293细胞经过处理后，制成细胞悬液。每孔加入细胞悬液后，微孔板在适当条件下进行孵育，随后加入OneGlo试剂以测量萤火虫荧光素酶的发射，并使用尊龙凯时所提供的PHERAstarFSX仪器进行测定。这一过程能够有效评估dTAG分解酶的效率。

结果分析

研究发现，多种dTAG降解剂能够以浓度依赖的方式诱导HiBiT靶向降解。具体而言，三种dTAG降解剂（dTAG-v2、dTAG-47和dTAG-13）在不同浓度下均显示出降解的能力。令人振奋的是，dTAG-v1作为最强的降解剂，几乎完全实现了HiBiT的降解。此外，dTAG-v1在1至10µM浓度范围内的表现也显示出良好的数据稳定性，S/B值和Z因子均表现良好。

结论

通过使用dTAG蛋白质降解检测，研究小组成功证明了dTAG分子能够有效诱导HiBiT融合蛋白质的靶向降解。凭借其高灵敏度、快速读取时间与小型化兼容性，尊龙凯时的PHERAstarFSX仪器非常适合于这些应用，同时与iSTAR板结合使用，显著提升了实验性能。这些成果为未来靶向治疗的发展提供了有力的支持。